反相

反相

液-液色谱系统中,如果采用相对非极性固定相和极性流动相,则称为反相。反相液-液色谱系统一般可用于分离非极性或弱极性化合物。
液-液色谱系统中,如果采用相对非极性固定相和极性流动相,则称为反相。反相液-液色谱系统一般可用于分离非极性或弱极性化合物。
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反向色谱流动相中甲醇和乙腈有什么区别

乙腈的极性是6.2,甲醇的极性是6.6,水是10.2,乙腈的洗脱能力比甲醇的大,但乙腈比甲醇贵,毒性比甲醇强,一般能用甲醇就尽量用甲醇,洗柱子用甲醇
乙腈的极性是6.2,甲醇的极性是6.6,水是10.2,乙腈的洗脱能力比甲醇的大,但乙腈比甲醇贵,毒性比甲醇强,一般能用甲醇就尽量用甲醇,洗柱子用甲醇…

反向色谱流动相中甲醇和乙腈有什么区别

乙腈毒性是甲醇的十倍,价格是甲醇的六倍。 再有就是乙腈的洗脱能力较甲醇强,一般100%的甲醇的洗脱能力与66%乙腈水的洗脱能力相当。 总体来说,用甲醇较乙腈好,在可以用甲醇的时候尽量用甲醇,当然如果只能用乙腈的话,也就没办法了。
乙腈毒性是甲醇的十倍,价格是甲醇的六倍。 再有就是乙腈的洗脱能力较甲醇强,一般100%的甲醇的洗脱能力与66%乙腈水的洗脱能力相当。 总体来说,用甲醇较乙腈好,在可以用甲醇的时候尽量用甲醇,当然如果只能用乙腈的话,也就没办法了。…

反向色谱流动相中甲醇和乙腈有什么区别

很多时候 甲醇跟乙腈 是可以替换用的 。但是 乙腈比较贵。。 但是 需注意点 :  甲醇的截止波长是190nm 乙腈是210nm  这个意思是 如果 你要测的组分特征波长是 在190左右的话 要选择乙腈作为流动相。
还有 使用的时候要注意安全 。。乙腈 是致癌的 。甲醇对人体也有伤害。
很多时候 甲醇跟乙腈 是可以替换用的 。但是 乙腈比较贵。。 但是 需注意点 :  甲醇的截止波长是190nm 乙腈是210nm  这个意思是 如果 你要测的组分特征波长是 在190左右的话 要选择乙腈作为流动相。还有 使用的时候要注意安全 。。乙腈 是致癌的 。甲醇对人体也有伤害。…

反向色谱流动相中甲醇和乙腈有什么区别

两者的极性不同,在分析同一种样品时,色谱图出峰的时间不同,甲醇的极性比乙腈强,一般他们于水的混合比例不同,它们的粘度不同。
两者的极性不同,在分析同一种样品时,色谱图出峰的时间不同,甲醇的极性比乙腈强,一般他们于水的混合比例不同,它们的粘度不同。…

液相色谱正、反相分析系统切换时,应注意什么?有何要求?

C18色谱柱 硅胶正相色谱柱的 步骤

 

一、            液谱仪上连接的是C18色谱柱,用纯甲醇(色谱级)以1.0ml/min的流速,冲10~20分钟,然后将C18色谱柱从仪器上卸下来。

二、            不要安装色谱柱在仪器上,用纯异丙醇(色谱级)以1.0ml/min的流速,冲10分钟。一般10分钟后压力基本稳定,如果不稳定就要延长冲洗时间直到压力稳定后再进行下一步。(在这期间控拨进样器3次)

三、            换用正己烷(色谱级)以2.0ml/min的流速,冲20分钟。(在这期间控拨进样器3次)

四、            硅胶正相色谱柱 安装在液谱仪上,继续用正己烷(色谱级)以2.0ml/min的流速,冲10分钟。

五、            换所需分析样品的流动相,以2.0ml/min的流速,直到基线稳定后,方可进样。

 

以上所有步骤中,每次换流动相时都必须排气泡。

各位同仁磨刀不误砍柴工,心急吃不了热豆腐,换柱子时耐心点!

 

硅胶和水会产生不可逆吸附(硅胶在水里水解,变成水玻璃了)一旦发生后,色谱柱的分离性能会发生很大变化。所以硅胶正相色谱柱是不能用水的,而且流动相在使用的时候也最好做脱水处理,比如放些分析筛吸附流动相中的水。这样才能延长硅胶色谱柱的使用寿命,希望你能好好保护他。稍不小心就有可能报废。

所以千万不能让带有水的流动相进入到正相色谱柱中

 

 

正相换反相,就随便点了。用异丙醇过渡下,就可以换反相流动相用了。

C18色谱柱 换 硅胶正相色谱柱的 步骤   一、            液谱仪上连接的是C18色谱柱,用纯甲醇(色谱级)以1.0ml/min的流速,冲10~20分钟,然后将C18色谱柱从仪器上卸下来。 二、&…

液相色谱正、反相分析系统切换时,应注意什么?有何要求?

哈哈
哈哈
,请大家多多关照。

反相色谱系统切换成正相系统并不是简单地用正相流动相冲洗就可以完成的事情。首先,大多数情况下,需要更换色谱柱,因为正相填料和反相填料有较大的差别。例如:反相填料大多是C18C8烷基键合相,而正相的填料则大多为硅胶。

反相流动相里一般都含有水分,而正相色谱柱很忌讳用水,绝大部分正相流动相都不与水互溶。虽然有的文献里正相流动相加少量的水,但是一般不建议这样做。因此,在反相改为正相时,要彻底冲洗系统。如果反相的流动相有盐,要先用水洗,然后依次用甲醇-异丙醇,过度到正相流动相后再接正相色谱柱。正相切换到反相则可以采取相反的步骤。如果正相的流动相与反相互溶的话,可以直接用。

反相色谱系统切换成正相系统并不是简单地用正相流动相冲洗就可以完成的事情。首先,大多数情况下,需要更换色谱柱,因为正相填料和反相填料有较大的差别。例如:反相填料大多是C18或C8烷基键合相,而正相的填料则大多为硅胶。反相流动相里一般都含有水分,而正相色谱柱很忌讳用水,绝大部分正相流动相都不与水互溶。虽然有的文献里正相流动相加少量的水,但…

反相柱进酸了,还能再生吗?

试一下吧,只有是以下才能知道结果。
试一下吧,只有是以下才能知道结果。

反相柱进酸了,还能再生吗?

是纯甲酸吧?那估计够呛,不过可以试试。一般来说,反相柱流动相中可以加酸,如甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸等等,但不能加过多,否则会对色谱柱造成不可逆转的损伤
是纯甲酸吧?那估计够呛,不过可以试试。一般来说,反相柱流动相中可以加酸,如甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸等等,但不能加过多,否则会对色谱柱造成不可逆转的损伤…

反相柱的再生的具体步骤请教

  一般来说,所有的清洗方法都有类似的形式。所用的溶剂都是随溶剂强度增加,经常最后一个溶剂是非常疏水的(如醋酸乙酯甚至是烃),可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。我们必须保证一系列溶剂中每个溶剂都能与下一个溶剂互混。清洗过程要结束时,必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。例如,异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的溶剂,因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大,必须确保较低的流速以免使泵压过高。当然,如果使用紫外检测器的话,避免溶剂在紫外区域有吸收,要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。

    
对于典型的硅胶键合柱来说如果没有缓冲溶液的话推荐使用以下溶剂系列:

    100
%甲醇
    100
%乙晴
    75
%乙晴-25%异丙醇
    100
%异丙醇
    100
%二氯甲烷
    100
%正己烷

    
用二氯甲烷或正己烷以后,由于溶剂相容性柱子必须用异丙醇冲洗后才能用原来的水相溶剂。每种溶剂至少冲洗10个柱体积。如250mm×4.6mmHPLC分析柱,分析者可以用12ml/min的流速来冲洗,要回复原来的溶剂体系,不需要每一步都冲洗,可以跳过中间步骤。中间步骤推荐使用异丙醇,然后用没有缓冲的流动相,最后回复起始流动相配置。四氢呋喃是另外一种比较受欢迎的去除污染的溶剂。如果使用者怀疑柱子被严重污染,可以二甲基亚砜(DMSO)或者二甲基甲酰铵和水按5050的比例混合用低于0.5ml/min的流速流过色谱柱。成功再生反相柱子是一个非常耗时间的过程,溶剂冲洗可以利用梯度系统过夜操作。

  一般来说,所有的清洗方法都有类似的形式。所用的溶剂都是随溶剂强度增加,经常最后一个溶剂是非常疏水的(如醋酸乙酯甚至是烃),可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。我们必须保证一系列溶剂中每个溶剂都能与下一个溶剂互混。清洗过程要结束时,必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。例如,异丙醇是一个非常好的作为…

反相柱的再生的具体步骤请教

精神科大夫
精神科大夫
,科技在进步,文明在退步!
1.取下色谱柱,重新连接到色谱仪上,让流动相反方向流过色谱柱,流速为通常使用正常流速的一半。。
2.用HPLC级水冲洗掉盐/缓冲液。 用25毫升5-10%的甲醇或乙腈水溶液冲洗色谱柱。
3.用25毫升异丙醇冲洗色谱柱。(注:由于异丙醇的粘度大,建议注意据柱压力变化作调整,如流速降到0.1-0.3ml/min。)
4.用25毫升二氯甲烷冲洗色谱柱。
5.用25毫升正己烷冲洗色谱柱。
6.再次用25毫升二氯甲烷冲洗色谱柱。
7.用25毫升异丙醇冲洗色谱柱。(注:由于异丙醇的粘度大,建议注意据柱压力变化作调整,如流速降到0.1-0.3ml/min。)
8.按正确的流动方向,把色谱柱重新连接到色谱上。 用不含缓冲液的流动相冲洗色谱柱,然后重新倒入缓冲液。
9.用25到50毫升流动相平衡色谱柱。
10.注入标准物或样品,检查性能是否恢复。
1.取下色谱柱,重新连接到色谱仪上,让流动相反方向流过色谱柱,流速为通常使用正常流速的一半。。 2.用HPLC级水冲洗掉盐/缓冲液。 用25毫升5-10%的甲醇或乙腈水溶液冲洗色谱柱。 3.用25毫升异丙醇冲洗色谱柱。(注:由于异丙醇的粘度大,建议注意据柱压力变化作调整,如流速降到0.1-0.3ml/min。) 4.用25毫升二氯甲烷冲洗…
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